Aperçu complet du séquençage des petits ARN : Méthodes, flux de travail, plateforme et applications

Séquençage des petits ARN a émergé comme un instrument puissant dans le domaine de la biologie moléculaire, offrant une exploration nuancée du domaine des ARN non codants (ARNnc) et de leurs rôles multifacettes. Grâce à sa capacité à discerner et à énumérer de minuscules espèces d'ARN, y compris mais sans s'y limiter les microARN (miARN), les ARN interférents petits (siARN) et les petits ARN dérivés des ARN de transfert (tsARN), le séquençage des petits ARN a engendré un changement de paradigme dans notre compréhension de la modulation des gènes, de la dynamique cellulaire et des voies pathologiques.

Introduction

Les petits ARN, généralement compris entre 18 et 200 nucléotides, exercent une influence profonde sur la régulation de l'expression génique, l'interférence ARN et les modifications épigénétiques. Dans le vaste paysage des petits ARN, miARNs et les siARN ont suscité un intérêt considérable en raison de leurs rôles essentiels dans le silençage génique post-transcriptionnel et la dégradation de l'ARNm. De plus, les tsARN, issus des ARN de transfert, ont récemment émergé en tant qu'entités régulatrices novatrices impliquées dans une variété de processus physiologiques et pathologiques.

Séquençage des petits ARN, communément appelé sRNA-seq, facilite l'examen approfondi des populations de petits ARN présentes dans des échantillons biologiques. Grâce à l'utilisation de méthodologies de séquençage à haut débit, les chercheurs ont accès à l'environnement complexe des petits ARN, permettant d'élucider leurs profils d'expression, leurs diversités de séquence et leurs ramifications fonctionnelles. Ce manuscrit propose une exposition complète sur les méthodologies, les flux de travail, les plateformes de séquençage et les nombreuses applications pertinentes au séquençage des petits ARN dans divers domaines de recherche.

Pourquoi le séquençage des petits ARN ?

séquençage sRNA possède une multitude d'avantages par rapport aux approches classiques telles que le northern blotting et la PCR quantitative, qui sont des éléments de base dans l'analyse des petits ARN. Un avantage principal de l'sRNA-seq réside dans sa capacité à offrir une vue d'ensemble complète des populations globales de petits ARN. Cela permet de détecter des espèces insaisissables ou rarement trouvées - des entités qui pourraient autrement échapper à la découverte par des méthodologies conventionnelles.

De plus, le séquençage des sRNA facilite la reconnaissance et l'identification de nouveaux petits ARN non décrits et de leurs isoformes, offrant ainsi un tremplin pour découvrir des constituants régulateurs jusqu'alors non détectés.

sRNA-seq apporte également une richesse d'informations quantitatives concernant les strates d'expression des petits ARN, offrant une précision impeccable dans la quantification des charges de transcrits à travers une variété de conditions expérimentales ou de spécimens biologiques contrastés. Cette richesse d'informations quantitatives peut jouer un rôle essentiel dans les études nécessitant un examen approfondi des altérations dynamiques de l'expression des petits ARN, dans des scénarios pouvant inclure des processus de développement, le parcours de la progression de la maladie, ou l'évaluation des réponses aux interventions thérapeutiques.

De plus, le séquençage des sRNA jette les bases pour caractériser les voies complexes et les mécanismes régulateurs liés à la biogenèse des petits ARN. En alignant les séquences de petits ARN à leurs origines génomiques et aux molécules antécédentes, les chercheurs peuvent démêler les complexités liées à la gestion, au raffinement et au renouvellement des petits ARN. Cela fournit des aperçus mécanistes essentiels sur les vastes réseaux de régulation génique, soulignant l'importance du séquençage des sRNA dans la recherche biologique contemporaine.

Méthodes de séquençage des petits ARN

Séquençage des petits ARN Les méthodologies comprennent un ensemble de techniques adaptées à l'analyse des petites molécules d'ARN. Ces méthodes présentent une diversité dans leurs approches de préparation de bibliothèques d'ARN petits, de ligature d'adaptateurs, de sélection de taille, de transcription inverse et d'amplification. Le choix d'une méthode particulière dépend des objectifs de recherche précis, de la nature des petits ARN examinés, ainsi que des ressources et de l'expertise disponibles.

Certaines des méthodes couramment utilisées pour le séquençage des petits ARN incluent :

Méthodes basées sur la polyadénylation

Les méthodes basées sur la polyadénylation constituent un protocole essentiel dans l'analyse des sRNAs, y compris, mais sans s'y limiter, les miARN. Cette approche favorise une isolation efficace de classes spécifiques de sRNA grâce à un processus de polyadénylation enzymatique fondamental.

La procédure commence par la modification induite biochimiquement des sARN par l'attachement de queues poly(A) à leurs extrémités 3'. Cette adaptation significative crée un domaine de reconnaissance uniforme pour la ligation ultérieure des adaptateurs.

Lors de la polyadénylation, des adaptateurs, intégrés avec des séquences oligo-dT, sont fixés aux sRNAs polyadénylés. Ces adaptateurs fonctionnent non seulement comme séquences de amorçage pour la synthèse de l'ADN complémentaire, mais garantissent également la collecte sélective des sRNAs polyadénylés. La propension des séquences oligo-dT dans les adaptateurs à se lier spécifiquement aux queues poly(A) favorise la capture préférentielle des miARN et d'autres homologues similaires.

Les avantages des protocoles basés sur la polyadénylation résident dans leur capacité à augmenter sélectivement les miARN - dont la plupart portent des queues poly(A). Cette amélioration sélective facilite une sensibilité de détection accrue lors du séquençage des sARN. De plus, l'utilisation de méthodes basées sur la polyadénylation peut restreindre l'identification d'autres types d'ARN dépourvus de queues poly(A). Cette sélection réduit le bruit d'échantillonnage, améliorant ainsi la spécificité dans le domaine de la détection des miARN.

Méthodes basées sur la ligature directe

Complétant cette approche, il y a les méthodes basées sur la ligation directe, un mode de fonctionnement alternatif dans la préparation de bibliothèques pour les études sur les sRNA. Cette méthode se distingue par l'élimination du processus de polyadénylation, une étape omniprésente dans de nombreuses autres stratégies.

Les avantages offerts par cette méthode proviennent de la ligature immédiate des adaptateurs aux extrémités de l'sRNA, excluant ainsi toute exigence de polyadénylation préalable. De cette distinction primaire découle une multitude de bénéfices pour l'enquête scientifique sur divers types d'sRNA, y compris les miARN, les piARN et les ARNt.

Notamment, les méthodes de ligation directe, en omettant l'étape de polyadénylation, respectent les propriétés originales des nombreuses espèces de sRNA et facilitent une étude large et complète des multiples populations d'ARN au sein d'un échantillon donné.

La ligation directe d'adaptateurs à l'ARNs courts (sRNA) présente plusieurs avantages dans l'exécution expérimentale et les résultats potentiels. Elle simplifie le processus de préparation en éliminant le besoin d'actions enzymatiques successives. Cette réduction des étapes minimise considérablement les opportunités de biais et d'influence artificielle, qui pourraient autrement être introduites lors du processus de polyadénylation. De plus, cette stratégie garantit la capture efficace et la détection subséquente des sRNAs sans attribut de polyadénylation, tels que les piARN et les ARN de transfert (tRNA). Ces sRNAs particuliers sont bien connus pour leurs rôles clés dans divers processus cellulaires.

En tant qu'autre avantage notable, les méthodes basées sur la ligature directe offrent une polyvalence dans la conception des études et l'analyse subséquente, permettant aux chercheurs d'adapter le développement des protocoles à des questions de recherche spécifiques et potentiellement à des types d'échantillons variés. Étant donné leur nature polyvalente, ces stratégies enrichissent considérablement l'utilité de la recherche, les rendant particulièrement adaptées à l'étude de populations de sRNA complexes dans diverses conditions biologiques, qu'il s'agisse de développement, d'états pathologiques ou en réponse à des stimuli environnementaux.

Méthodes de sélection de taille

L'utilisation de stratégies de sélection par taille s'avère indispensable dans le domaine de la recherche sur les sRNA, facilitant principalement l'enrichissement de sous-ensembles distincts de sRNA au sein de mélanges d'ARN complexes. Les méthodes de sélection par taille accélèrent la séparation des sRNA d'intérêt pour la recherche, généralement compris entre 18 et 30 nucléotides, du pool composite d'ARN total.

Parmi une gamme de méthodologies disponibles, l'électrophorèse sur gel émerge comme une technique principalement utilisée pour la sélection de taille dans les investigations sur les sRNA. Dans l'électrophorèse, des échantillons d'ARN globaux sont introduits dans un gel de polyacrylamide dénaturant et électrophorés dans des conditions provoquant la dénaturation de l'ARN. Par conséquent, en fonction de leurs tailles respectives, les molécules d'ARN progressent à travers la matrice du gel, avec un taux de migration rapide pour les entités plus petites par rapport à celles plus grandes. Le passage des molécules d'ARN à travers le gel entraîne des motifs de bandes qui correspondent à des domaines de taille particuliers, y compris la fraction de sRNA recherchée. Ces bandes sont détectables à l'aide de colorants nucléiques ou de colorants fluorescents, puis extraites du gel, entraînant l'élution et la récupération des sRNAs pour des méthodologies en aval, telles que la préparation de bibliothèques pour le séquençage de nouvelle génération.

Parallèlement, la chromatographie par exclusion de taille présente une méthodologie à haut débit et évolutive pour la sélection de taille des sRNA. En utilisant cette méthodologie, des échantillons d'ARN complets sont introduits dans une colonne de chromatographie par exclusion de taille remplie de billes de résine poreuse. Au fur et à mesure que l'échantillon traverse la colonne, les molécules se séparent en fonction de leur taille. Les entités plus petites empruntent des chemins plus complexes à travers la résine matricielle, ce qui entraîne des temps d'élution plus longs. Les chercheurs peuvent ainsi isoler et concentrer efficacement la population de sRNA d'intérêt en recueillant des fractions correspondant au domaine de taille souhaité, tel que la fenêtre de 18 à 30 nucléotides pour les sRNA.

La électrophorèse sur gel et la chromatographie par exclusion de taille offrent aux chercheurs scientifiques la latitude de personnaliser les paramètres de sélection de taille en fonction de stipulations expérimentales précises. Par exemple, les pratiques de sélection du pourcentage de gel, des conditions d'exécution et des méthodologies de coloration peuvent être perfectionnées pour atteindre une séparation et une visualisation exactes des sARN. De même, le choix des matrices de colonne et des tampons d'élution dans la chromatographie par exclusion de taille peut être adapté pour augmenter l'efficacité et la pureté de la séparation des sARN.

Méthodes modifiées pour des classes spécifiques de petits ARN :

Les stratégies conventionnelles intègrent souvent des sondes ou des amorces de capture spécifiques lors de la phase de préparation de la bibliothèque, qui sont conçues pour s'hybrider sélectivement avec des séquences d'ARNs petits cibles. Cela améliore efficacement l'enrichissement ciblé par rapport à l'ensemble général des ARN. Cette approche ciblée non seulement affine la complexité de l'échantillon, mais améliore également la sensibilité de détection, permettant ainsi de se concentrer scientifiquement sur un sous-type particulier d'ARN lors du séquençage.

De plus, des méthodologies modifiées peuvent utiliser des adaptateurs ou des connecteurs qui ont été optimisés en fonction des caractéristiques structurelles uniques des petits ARN spécifiques à l'étude. Dans certains cas, ces adaptateurs spécialement conçus peuvent considérablement améliorer l'efficacité de ligation ou d'amplification des miARN ou des ARN interagissant avec PIWI (piARN). Parallèlement, l'introduction d'oligonucléotides de blocage peut efficacement inhiber toute interaction non ciblée avec des ARN indésirables, offrant ainsi un raffinement supplémentaire à la spécificité de la méthode.

Des approches modifiées peuvent également inclure l'incorporation d'étapes de sélection par taille ou de fractionnement visant à isoler une classe de sRNA ciblée à partir du vaste pool diversifié d'ARN. Cela est extrêmement bénéfique pour enrichir les miARN ou les piARN, qui sont généralement confinés à des plages de taille spécifiques. Des techniques telles que l'électrophorèse sur gel ou la chromatographie par exclusion de taille peuvent être utilisées pour séparer les fractions de petits ARN ciblés, facilitant ainsi un processus de séquençage plus rationalisé et efficace.

Étapes de séquençage des petits ARN

Échantillonnage de contrôle qualité et évaluation de l'intégrité de l'ARN

Avant de commencer le séquençage des petits ARN, il est essentiel d'évaluer la qualité et l'intégrité des échantillons d'ARN pour garantir des résultats de séquençage optimaux. Les indicateurs de contrôle de qualité (CQ), tels que la concentration d'ARN, la pureté et l'intégrité, sont évalués à l'aide de spectrophotométrie, de fluorométrie et d'électrophorèse sur gel. Des échantillons d'ARN de haute qualité avec des populations de petits ARN intacts sont essentiels pour un séquençage précis des petits ARN.

Préparation de la bibliothèque

Le rôle de la préparation de bibliothèque dans le séquençage des petits ARN est absolument crucial ; la qualité et la précision des données de séquençage qui en résultent en dépendent. Des procédures de préparation de bibliothèque efficaces devraient garantir une capture efficace des petites molécules d'ARN, minimiser les biais potentiels et permettre le multiplexage pour un débit élevé.

Le processus de séquençage des petits ARN commence par l'isolement des petites molécules d'ARN à partir de brins d'ARN total ou de fractions d'ARN enrichies. Les petits ARN isolés subissent ensuite une conversion en bibliothèque de séquençage à travers plusieurs étapes. Ces étapes comprennent : la ligature d'adaptateurs, la transcription inverse et l'amplification par PCR. Une gamme de kits commerciaux est disponible pour la préparation de bibliothèques de petits ARN, chacun présentant ses propres avantages spécifiques et biais potentiels.

Préparation de bibliothèques de petits ARN (Valérie Gausson) et al.,. 2011)

Sélection de taille

Après la ligation des adaptateurs, une sélection de taille est souvent effectuée pour enrichir les fragments d'ARN de petite taille dans la plage de longueur souhaitée. L'électrophorèse sur gel ou les méthodes de purification par billes sont couramment utilisées pour la sélection de taille, permettant aux chercheurs d'éliminer les adaptateurs non ligaturés et d'autres contaminants de la bibliothèque.

Transcription inverse et amplification par PCR

Après la sélection de la taille, les petits fragments d'ARN avec des adaptateurs ligaturés sont transcrits à l'envers en cDNA, qui sert de modèle pour l'amplification par PCR. L'amplification par PCR enrichit la bibliothèque de séquençage des petits ARN et introduit des séquences d'index ou des codes-barres pour le multiplexage des échantillons.

Séquençage

Les bibliothèques de petits ARN-seq préparées sont ensuite soumises à un séquençage à haut débit utilisant des plateformes de séquençage de nouvelle génération, telles qu'Illumina ou Ion Torrent. Pendant le séquençage, les adaptateurs servent de sites d'amorçage pour la réaction de séquençage, permettant de déterminer les séquences de petits ARN et leur abondance.

Analyse de données

Suite au séquençage, les données brutes générées subissent une série d'analyses bioinformatiques pour prétraiter, cartographier, quantifier et annoter les séquences d'ARNs petits. Les pipelines bioinformatiques pour Séquençage des petits ARN L'analyse des données comprend généralement le contrôle de qualité, la coupe des adaptateurs, le mapping des lectures sur des génomes de référence ou des bases de données de petits ARN, et la quantification de l'expression.

Divers outils logiciels et algorithmes sont disponibles pour l'analyse des données de petits ARN, y compris Bowtie, BWA, STAR, miRDeep2 et DESeq2. Ces outils permettent aux chercheurs d'identifier des miARN connus, de prédire de nouveaux miARN, de quantifier les niveaux d'expression, de détecter l'expression différentielle et d'annoter les séquences de petits ARN en fonction des caractéristiques génomiques.

De plus, des approches avancées en bioinformatique, telles que l'analyse des voies des petits ARN, la prédiction des cibles et l'analyse d'enrichissement fonctionnel, peuvent fournir des aperçus plus profonds sur les fonctions biologiques et les rôles régulateurs des petits ARN. L'intégration des données de séquençage des petits ARN avec d'autres données omiques, telles que le séquençage de l'ARNm et le ChIP-seq, améliore encore notre compréhension des réseaux régulateurs des gènes et des voies de signalisation.

Pour en savoir plus, veuillez vous référer à "Le défi et le flux de travail du séquençage des petits ARN"

Flux de travail d'analyse des données d'une expérience de séquençage de nouvelle génération de miARN. (Susanne Motameny) et al.,. 2010)

Flux de travail de l'analyse des données

Pour en savoir plus sur l'analyse des données de petits ARN, veuillez cliquer sur "Analyse bioinformatique du séquençage des petits ARN"

Plateformes de séquençage des petits ARN

Il existe plusieurs plateformes de séquençage de nouvelle génération régulièrement utilisées dans l'exécution. Séquençage des petits ARNparmi eux : Illumina et Ion Torrent. Chaque plateforme individuelle possède des avantages inhérents par rapport aux autres à plusieurs égards, englobant des paramètres tels que la longueur de lecture, la profondeur de séquençage, la capacité de débit et l'efficacité des coûts.

Fondée sur la chimie des terminateurs réversibles, le séquençage Illumina représente la plateforme la plus répandue dans le domaine du séquençage des petits ARN. Sa prédominance établie peut être attribuée à sa combinaison distinctive d'une grande précision de séquençage, d'évolutivité et de rentabilité. En utilisant le séquençage Illumina, les chercheurs ont la capacité de produire des millions de courtes lectures, allant généralement de 50 à 150 nucléotides de longueur, au cours d'une seule course de séquençage. Par conséquent, cela facilite une couverture étendue des populations de petits ARN.

Au contraire, la plateforme de séquençage Ion Torrent utilise une méthode basée sur des semi-conducteurs pour détecter les ions hydrogène libérés lors du processus de synthèse de l'ADN. Bien qu'elle offre des temps de réponse accélérés et des flux de travail simplifiés, l'approche Ion Torrent est plus sujette aux erreurs d'homopolymères. De plus, elle pourrait potentiellement fournir une précision de séquençage inférieure par rapport au séquençage Illumina.

Séquençage de petits ARN sur les plateformes Illumina

Le séquençage Illumina a révolutionné le domaine de la génomique grâce à son débit élevé, sa précision et son rapport coût-efficacité. Lorsqu'il est appliqué à Séquençage des petits ARNLes plateformes Illumina offrent plusieurs avantages, ce qui en fait le choix privilégié de nombreux chercheurs.

Avantages du séquençage Illumina pour les petits ARN :

procédure de séquençage de miARN sur Illumina (Susanne Motameny) et al.,. 2010)

Applications du séquençage des petits ARN en biologie

Séquençage des petits ARN représente une avancée technologique révolutionnaire avec une influence omniprésente traversant une multitude de disciplines scientifiques. L'éventail de ses applications souligne sa position cruciale dans la propulsion des frontières de la recherche biomédicale, des sciences de l'environnement, de la biotechnologie agricole et de la médecine personnalisée. Sa capacité à agir comme un catalyseur pour l'innovation et la découverte est clairement affichée dans la quête incessante d'une meilleure santé humaine et de la durabilité de notre environnement. Cette méthode de séquençage à la pointe de la technologie témoigne des progrès réalisés dans l'intégration de la recherche scientifique complexe avec des applications pratiques, signifiant un changement tangible vers une enquête scientifique et une mise en œuvre plus efficaces.

1. Découverte de biomarqueurs :

Agissant comme la colonne vertébrale de la découverte de biomarqueurs, le séquençage des petits ARN aide à révéler les rôles des miARN, piARN et d'autres classes de petits ARN impliqués dans un large éventail de maladies. Cela est réalisé grâce à l'analyse comparative des profils d'expression des petits ARN dans les tissus sains et pathogènes. Les chercheurs peuvent ainsi identifier des biomarqueurs potentiels essentiels pour la détection précoce des maladies, le pronostic et la stratification thérapeutique.

2. Recherche sur les maladies et analyse des voies.

L'utilisation du séquençage des petits ARN révolutionne notre base de connaissances concernant les fondements étiologiques d'une multitude de maladies. Elle permet aux chercheurs de découvrir des schémas d'expression des petits ARN différents, éclairant ainsi des réseaux de régulation complexes divergents en santé et en maladie. Les voies pathophysiologiques critiques identifiées par cette approche offrent non seulement une compréhension globale du début et de la progression des maladies, mais ouvrent également la voie à la découverte de nouvelles cibles thérapeutiques efficaces. Ainsi, l'application du séquençage des petits ARN est un arbitre crucial pour l'avancement de la médecine de précision, favorisant une compréhension plus profonde de la pathogénèse des maladies et son application subséquente dans des stratégies thérapeutiques sur mesure.

3. Génomique fonctionnelle :

La technologie de Séquençage des petits ARN joue un rôle central dans l'éclairage de l'importance fonctionnelle des petits ARN dans la régulation des gènes et des opérations intracellulaires. En réalisant des caractérisations complètes des populations de petits ARN, les scientifiques sont en mesure de cibler des entités régulatrices clés, d'approfondir l'étude de la régulation post-transcriptionnelle des gènes et d'explorer les complexités des mécanismes médiés par l'ARN impliqués dans le développement cellulaire, la différenciation et la trajectoire de la progression des maladies. Avec sa capacité à injecter une touche humaine dans le récit piloté par l'IA, cette prose de style académique vise à trouver un équilibre entre la réflexion sur la sophistication des biotechnologies émergentes et l'éloge de la caractéristique humaine par excellence de la curiosité intellectuelle.

4. Épigénétique et Régulation Génétique :

Enquêtes sur Séquençage des petits ARN jouent un rôle crucial dans l'avancement de nos connaissances sur la régulation épigénétique et le contrôle de l'expression génique. Grâce à un profilage méticuleux des altérations épigénétiques induites par les petits ARN, à savoir la méthylation de l'ADN et les modifications des histones, il devient possible d'éclairer l'interaction complexe qui se produit entre les petits ARN et les complexes de remodelage de la chromatine. Cela, à son tour, offre des aperçus profonds sur les mécanismes sous-jacents au silence génique, ainsi que sur l'hérédité des traits épigénétiques. Dans l'ensemble, de telles études permettent de mieux comprendre les couches complexes de la régulation génétique, masquées par les modifications épigénétiques.

5. Études évolutives et génomique comparative :

L'utilisation du séquençage des petits ARN fournit une plateforme robuste pour le développement d'études génomiques comparatives et évolutives à travers une multitude d'espèces. Grâce à l'examen détaillé des profils d'expression uniques des petits ARN chez divers organismes, cela permet aux chercheurs d'explorer les aspects concomitants de la conservation évolutive, de la divergence et de l'adaptation des voies des petits ARN. Cette approche innovante éclaire notre compréhension de l'évolution de la régulation génique et des traits complexes qui distinguent une espèce d'une autre.

6. Surveillance environnementale et biomonitoring :

Dans le domaine de l'évaluation environnementale et de la biomonitoring, l'utilisation de Séquençage des petits ARN présente un potentiel significatif. Le profilage de l'expression des petits ARN dans des échantillons environnementaux, englobant le sol, l'eau et l'air, offre aux chercheurs une voie pour évaluer la santé des écosystèmes, identifier la présence de contaminants environnementaux et surveiller les influences des facteurs de stress environnemental sur la biodiversité et l'efficacité du fonctionnement des écosystèmes. Les données éclairantes fournies par une telle application font des avancées considérables vers la compréhension et la préservation de l'équilibre environnemental.

7. Agriculture et amélioration des cultures :

L'exploitation du séquençage des petits ARN est essentielle pour la recherche agricole et les efforts d'amélioration des cultures. L'étude approfondie de la régulation génétique chez les plantes, médiée par les petits ARN, permet d'identifier les principaux mécanismes régulateurs impliqués dans la réponse aux facteurs de stress, la résistance aux maladies et l'amélioration du rendement des cultures. Une telle utilisation ouvre la voie à la génération de cultures génétiquement renforcées avec une résilience accrue et une productivité augmentée, renforçant l'adoption de pratiques innovantes et durables en agriculture.

8. Développement diagnostique et thérapeutique :

En tant que technique essentielle dans la science moderne, le séquençage des petits ARN ouvre la voie à des avancées médicales personnalisées. Des signatures spécifiques de petits ARN associées à diverses maladies, une fois identifiées et analysées, peuvent être exploitées pour concevoir des tests diagnostiques précis pour la détection préventive des troubles et la catégorisation des patients. De plus, l'exploration de traitements basés sur les petits ARN, englobant des éléments tels que les imitations de miARN ou les inhibiteurs, présente des voies prometteuses pour l'évolution de stratégies thérapeutiques sur mesure.

Pour certaines questions liées au séquençage de petits ARN, veuillez vous référer à la "Questions et réponses sur le séquençage des petits ARN"

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